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恩拉霉素工藝與搖瓶柜

更新時間:2011-02-15 瀏覽次數(shù):1956

 將鏈霉菌 Streptomyces sp .NJwGY3665 菌種接到葡萄糖0.5%,牛肉膏 0.5 %,蛋白胨 0.5%,NaCl0.5%,瓊脂

  1.5%、水 96.5%,pH6.0的葡萄糖營養(yǎng)培養(yǎng)基中,進行斜面培養(yǎng),在28℃下培養(yǎng) 2天。取斜面菌種,加入2~3ml無菌水(每18×180mm的試管斜面菌種),用接種環(huán)輕輕將菌苔洗下,制成孢子懸液,取 0.5ml孢子懸液接種到含 40ml葡萄糖 1.0%,玉米漿 3%,CaCO31%、酵母膏 0.5%、 NaCl0.1%、水 94.4%,pH7.0的液體種子培養(yǎng)基中培養(yǎng) 3天,培養(yǎng)溫度為 28℃,轉(zhuǎn)速為 200rpm。再將 5ml種子液接入到裝液量為100ml含有葡萄糖 4.0%,淀粉 2.0%,玉米漿 2.0%、酵母膏 0.1%、黃豆餅粉 2%、NaCl0.5%、CaCO31.5%、 NH4Cl0.5%、磷酸二氫鉀 0.2%、硫酸銨 0.3%、水 86.9%的發(fā)酵培養(yǎng)集中,在28℃,180rpm,pH6.0的條件下?lián)u床發(fā)酵培養(yǎng) 5天,獲得含有恩拉霉素的菌絲體,將 1g發(fā)酵后的菌絲體,用去離子水清洗,懸浮在 30mL乙醇中,乙醇的體積分數(shù)為 70%,pH為 4.5,用 KQ-100型超聲機進行微生物細胞破碎 15min,得到含有恩拉霉素的混合物,將破碎后的混合物用 HYG-Ⅱa型搖瓶柜振蕩(調(diào)節(jié)搖瓶柜的溫度和轉(zhuǎn)速分別為 15℃,180rpm)提取

  1小時,得到含有恩拉霉素的提取液,然后將含有恩拉霉素的提取液在 1500r/min的轉(zhuǎn)速下離心15min,收集含有恩拉霉素的上清液,將上清液在 30℃下減壓濃縮至無液體,得到恩拉霉素粗提品。

  將大孔樹脂按照常規(guī)處理方法進行預(yù)處理后,裝入帶有恒溫保護套的玻璃柱子,用氯化鈉濃度為 0.09mol/L及甲醇體積分數(shù)為 70%的甲醇水溶液以 60mL/h的速度泵入柱子來完成平衡。恩拉霉素的粗提品溶解在 10mL乙醇中,放在柱子的頂端,靜止吸附 2小時,用0.5L的洗脫劑(甲醇/氯化鈉濃度為0.09mol/L及甲醇體積分數(shù)為 70%的甲醇水溶液的體積比為 1:9)梯度洗脫,將洗脫液用旋轉(zhuǎn)真空蒸發(fā)器減壓濃縮蒸干,產(chǎn)率達到 60%。

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